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本制品是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶。DNase I水解单链或双链DNA后的产物，5'端为磷酸基团，3'端为羟基。

本制品可以用于各种RNA样品的处理，提供了用于DNase I失活所需的EDTA，无RNase活性(RNase-free)。

DNase I活性依赖于钙离子，并能被镁离子或二价锰离子激活。镁离子存在条件下，DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点；二价锰离子存在条件下，DNase I可在同一位点剪切DNA双链，形成平末端，或1～2个核苷酸突出的粘末端。

• 制备不含DNA的RNA样品；
  
• RT-PCR反应前RNA样品中去除基因组DNA等可能的DNA污染；
  
• 体外T7，T3，SP6等RNA Polymerases催化的RNA转录后去除DNA模板；
  
• DNase I footprinting研究DNA-蛋白质相互作用；
  
• 缺口平移(nick translatioin)；
  
• 产生DNA随机片段文库；
  
• 细胞凋亡TUNEL检测中部分剪切基因组DNA作为阳性对照。

从牛胰腺纯化得到。


约32kDa(单体)。


37℃10分钟内，将能够完全降解1μg pBR322质粒DNA所需的酶量定义为1个活性单位。
活性检测条件：
40mM Tris-HCl(pH8.0)，10mM MgSO4，1mM CaCl₂，1μg of pBR322 DNA。

组分	200U	1000U
RNase-free DNase I溶液(1U/μL)	200μL	-
RNase-free DNase I溶液(50U/μL)	-	20μL
10×Reaction Buffer	200μL	1mL
25mM EDTA	200μL	1mL

保存：-20℃。


50mM Tris-acetate(pH7.5)，10mM CaCl₂，50%(v/v)glycerol。


10×Reaction Buffer：
100mM Tris-HCl(pH7.5 at 25℃)，25mM MgCl₂，1mM CaCl₂。


加入EDTA至终浓度为2.5mM后，65℃加热10分钟可使DNase I失活。酚氯仿抽提也可以使DNase I失活。金属离子螯合剂，达到毫摩尔/升浓度的锌离子，0.1%的SDS，DTT、巯基乙醇等还原剂，50～100mM以上盐浓度均对DNase I有显著抑制作用。


不含其它DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶。

• 酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
  
• 本制品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• RT-PCR反应前RNA样品中DNA的去除：
  
  • 向一无RNA酶的EP管中依次加入下列试剂：
    

    成分	用量
    RNA	1μg
    10×Reaction Buffer	1μL
    补充经DEPC处理的去离子水	至9μL
    DNase I(1U/μL)	1μL

    • 如需处理较大量的RNA样品，可以按照比例放大上述反应体系。如果能在上述反应体系中加入适量RNase inhibitor以防止RNA降解则更佳。
  • 37℃孵育30分钟。
    
  • 向上述反应体系中加入1μL 25mM EDTA，65℃孵育10分钟以失活DNase I。
    
    • 在没有鏊合剂如EDTA等存在情况下加热，RNA可被水解。
  • 上述加热处理过的RNA样品即可直接用于处理好的RNA可用作RT-PCR反应的模板。
• 体外RNA转录后模板DNA的去除：
  
  • 在每含有0.5μg模板DNA的转录反应体系中加入1U DNase I。
    
    • 在某些情况下，模板DNA完全消化所需的DNase I的量需通过实验进行摸索。
  • 37℃孵育15分钟。
    
  • 酚/氯仿抽提失活DNase I。
• 缺口平移进行DNA标记：
  
  • 参考如下表格设置反应体系：
    

    成分	用量
    10×Reaction Buffer for DNA Polymerase I	2.5μL
    3 dNTP Mixture(1mM each,without the labeled dNTP)	1.25μL
    [α-32P]-dNTP,～110TBq/mmol(3000Ci/mmol)	1.85～3.7MBq (50～100μCi)
    DNase I (freshly diluted to 0.002U/μL)	1μL
    DNA Polymerase I,E.coli	0.5～1.5μL (5～15U)
    Template DNA	0.25μg
    补充无核酸酶去离子水	至25μL

    • 3 dNTP Mixture(1mM each,without the labeled dNTP)：分别取除已经标记的dNTP外的3种dNTP(100mM)各1μL加入到97μL的无核酸酶的去离子水中混匀即可。例如标记的为dATP，则需混合dTTP、dCTP和dGTP三种dNTP至每种的最终浓度为1mM。配制好的dNTP可存放于-20℃以备后续使用。
      
    • DNase I可以用1×Reaction Buffer for DNA Polymerase I进行稀释。
      10×Reaction Buffer for DNA Polymerase I：
      500mM Tris-HCl(pH7.5 at 25℃)，100mM MgCl₂，10mM DTT。
  • 立即15℃孵育15～60分钟。
    
  • 上述反应体系中加入1μL of 0.5M EDTA(pH8.0)终止反应。
    
  • 从中取出少量例如1μL检测标记效率。通常标记效率至少可以达到108cpm/μg DNA。
    
  • 可用Sephadex G-50或Bio-Gel P-60去除[α-³²P]-dNTP，以纯化获得标记的DNA。
• 其它用途可以参考上述用途进行。

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